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称号:Invitrogen Qubit 4荧光计
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产物简介:

合适样品名贵、瞄切确性请求极高的利用范畴

品牌:Thermofisher(Invitrogen)

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Invitrogen Qubit 4 荧光计

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出格合适样品名贵、瞄切确性请求极高的利用范畴

 

哪些用户须要利用Qubit 4 荧光计?

若是您的样品非常名贵或用于紧密利用范畴,或您为了取得研讨成果停止了庞大的投入,那末Invitrogen™ Qubit™ 4 荧光定量计便是您的抱负之选。想一想上面这些题目:

— 须要疾速检测RNA 样本的完全性和品德? — 我的样品非常名贵并且难以处置吗?

— 提取后的DNA、RNA 或卵白品德很少吗? — 该样品将被用于本钱昂扬的下流尝试吗?

— 我要利用诸照实时定量PCR (qPCR) 或下一代测序体例等须要紧密测定的尝试体例吗?

— 我要停止诸如转染等须要几天乃至几周能力取得成果的尝试吗?

— 我的样品制备进程庞杂并且须要诸如激光捕获显微切割等出格手艺吗?

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为甚么要利用Qubit 4 荧光计?

Qubit 4 荧光计接纳特地研制的荧光检测手艺和Invitrogen™ Molecular Probes™ 染料。这些染料荧光只要与特同性的靶份子连系时,能力发射荧光旌旗灯号,即使有游离核苷酸或降解核酸存在,这些染料仍能阐扬感化。Qubit 4 荧光定量即使在低浓度下亦具备今朝最高的DNA 和RNA 定量特同性和活络度。

※ 挑选性 — Qubit 荧光定量( 图1) 接纳Qubit 阐发试剂盒( 表1),其包含专利的染料,只要与DNA、RNA 或卵白质连系时方可收回荧光。因为Qubit 手艺只报告靶份子( 而不是杂质) 的浓度,是以这类特同性能够或许使您取得非常切确的成果


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图1. Qubit 荧光定量体系。

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表1. Qubit 阐发试剂盒的阐发规模。

 

※ 活络性 — 最低仅需1 uL 样品,能切确靠得住地定量浓度仅为10pg/_L 的DNA 和12.5μg/mL 的卵白质样本

※ 简略直观 — 反应活络的5.7 英寸黑色触摸屏,直观的导航按钮

※ 敏捷 — 全新的双核处置器,5 秒内疾速计较样品浓度,最多存储1000 个成果

※ 特性化 — 特性化设置惯例利用,可经由进程MyQubit 软件和搜集东西建立特性化assay,六国操纵说话可供挑选

上市12 年来,Qubit 荧光计一向以其极高的切确度和活络性,遭到环球上万个尝试室的喜爱。迄今为止,已有17,500 篇有关Qubit 的文献引述。最新推出的Qubit 4 荧光计承袭上一代仪器的高切确性,不只仅可切确丈量样品DNA,RNA 和卵白质含量,还具备全新的功效,包含:

※ 合用全新RNA IQ assay — 疾速靠得住地检测RNA 完全性和品德

※ 数据导出 — 除U 盘和USB 毗连电脑导出数据,还具备WiFi 功效

※ 内置试剂计较器 — 疾速计较设置装备摆设任务溶液所需的染料缓和冲液

 

Qubit 荧光定量的任务流程

Qubit 荧光定量接纳荧光染料对方针生物份子停止定量

接纳Qubit 4 荧光计实现的Qubit 阐发均接纳统一种通用尝试计划。停止DNA 和RNA 阐发只要夹杂而后读数,孵育时候仅为2 分钟,卵白质阐发孵育时候为15 分钟( 图2)。请登录 thermofisher.com/qubit,检查Qubit 阐发的尝试计划。尝试实现,Qubit 4 荧光计会主动保管您的尝试数据,最多1000 个。另外,您也能够或许经由进程U 盘,USB 数据线或WiFi 导出数据。

 

将染料缓和冲液置于室温下贮存,以取得最好成果。DNA、RNA和卵白质规范品置于4℃贮存。利用前,确保一切阐发试剂均在室温下。

* 除经常利用的 dsDNA, oligos, total RNA, microRNA, RNA IQ 和 protein 阐发以外,利用Ion Sphere Quality Control Kit,还可用于检测Ion Sphere Particle 的品德,以用于Ion PGM 测序仪。

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图2. 接纳Qubit 4 荧光计停止Qubit 阐发的任务流程。

 

Qubit 操纵简略直观


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内置试剂计较器。 输出样品和规范品的数目,利用此东西可赞助您疾速计较设置装备摆设任务溶液须要的染料缓和冲液。

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Qubit 荧光定量与NanoDrop及别的紫外分光光度计定量体例有何差别?

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Thermo ScientificTM NanoDropTM 及别的紫外分光光度计均接纳紫外吸光度停止检测,它没法辨别出DNA、RNA、降解核酸、游离核苷酸及别的杂质。而Qubit 定量平台接纳荧光染料检测特异方针份子的浓度。

虽然紫外接收定量法是最经常利用的一种DNA 或RNA 定量方,但其读数并不靠得住且不切确(1-4)。紫外吸光度读数不加辨别检测吸光度为260nm 的一切物资,包含DNA、RNA、卵白质、降解核酸和游离核苷酸。因为Qubit 4 荧光计只检测方针份子,是以其读数通俗低于A260 读数,定量更切确。

另外,分光光度计的活络度缺乏,没法实现低浓度DNA 和RNA的定量。相反,Qubit 4 荧光计能在较低的浓度规模内得出比接纳NanoDrop 分光光度计停止紫外接收检测更切确、紧密的成果( 图3)。鉴于上述错误谬误,利用荧光染料定量核酸已成为一种罕见的替换体例[5–8]。

 

低浓度下的切确度和精度比拟

Qubit 荧光定量能在较低的浓度规模内得出比接纳NanoDrop分光光度计停止紫外吸光度检测更切确、更紧密的成果。接纳Qubit dsDNA HS 阐发试剂盒及Qubit 荧光计,定量浓度仅为10pg/_L 的样本中的DNA,测得值在现实值的±12% 规模内( 图3A)。而接纳NanoDrop 分光光度计丈量上述不异样本,测得的浓度比现实值高46 倍。利用Qubit 荧光计检测低至10 ng/_LDNA 的样本(NanoDrop 分光光度计的报道上限值为2 ng/_L),测得值在现实值的±1% 规模内,利用NanoDrop 分光光度计测定的浓度在现实值的±5% 规模内。另外,接纳Qubit 荧光计检测DNA 浓度低至0.5 ng/_L 的样本,一切样本的反复差别(%CV)均_1% ( 图3B)。而接纳NanoDrop 分光光度计检测,只要DNA浓度为4ng/_L 及以上的样本的%CV 低于9%。

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图3. Qubit 荧光定量的切确度和精度。根据规范试剂盒尝试计划,在Qubit 荧光计中接纳Qubit dsDNA HS 阐发试剂盒反复10 次丈量浓度在0.01至10ng/_L 之间的lambda DNA。同时接纳NanoDrop ND-1000 分光光度计反复10 次丈量不异浓度的DNA,比拟成果的切确度(A) 和精度(B)。切确度界说为与已知浓度的均匀误差。标示的浓度是在Qubit 阐发管中浓缩前肇端样本的DNA 浓度。

 

针对DNA 或RNA 的挑选性比拟

接纳Qubit 荧光定量和紫外吸光度丈量核酸浓度最较着的差别在于Qubit 阐发的挑选性,Qubit 阐发针对目标份子具备极高的特同性,可供给较紫外吸光度更切确的信息。接纳紫外阐发时,同时含有DNA 和RNA 的样本成果无差别,您没法将它们DNA和RNA 辨别开来。而Qubit 荧光定量能够或许切确测定统一样本中的DNA 和RNA ( 图4)。在本尝试中,样本含有不异含量的DNA和RNA,接纳Qubit dsDNA BR 阐发试剂盒测得的DNA 浓度在现实含量的±2% 规模内。另外,在RNA 含量较DNA 高10倍的样本中,接纳DNA 阐发测得的浓度仅比现实值高7%。而接纳NanoDrop 分光光度计停止紫外吸光度检测,没法切确丈量上述样本中的DNA 和RNA 含量,这增添了后续尝试中犯错的能够或许性。

 

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图4. Qubit 阐发与紫外分光光度法比拟具备挑选性。接纳Qubit dsDNABR 和Qubit RNA BR 阐发试剂盒及Qubit 荧光计,根据试剂盒尝试计划检测含有lambda DNA (10 ng/uL) 和差别量的大肠杆菌核糖体RNA (0-100 ng/uL) 的样本,每一个样品反复3 次。而后接纳NanoDrop ND-1000分光光度计检测统一样本三次,接纳PerkinElmer Lambda 35 分光光度计检测一次。标示的浓度是在Qubit 阐发管中浓缩前肇端样本的DNA和RNA 浓度。白色和橙色趋向线别离表现肇端样本中DNA 和RNA 的现实含量。( 别离) 浓缩纯的浓缩DNA 和RNA 溶液,接纳PerkinElmer Lambda 35 分光光度计测定260 nm 处的光密度,使浓缩后溶液的光密度值为1.0,设定核酸的现实浓度。而后计较储液浓度,用于后续浓缩。接纳紫外阐发时,同时含有DNA 和RNA 的样本成果无差别- 您没法将它们辨别开来。

 

活络度和规模比拟

接纳Qubit 荧光计及Qubit 阐发试剂盒的活络度高于紫外吸光度检测,因为该阐发能够或许检测1–20uL 的样本,是以阐发的有用规模进一步扩展。Qubit dsDNA HS 和BR 阐发试剂盒笼盖的样本浓度规模为10 pg/uL 至1 ug/uL DNA。据制作商报道,NanoDrop 分光光度计笼盖的样本浓度规模为2 ng/uL 至15 ug/uL,因而可知,Qubit 合适的浓度规模更宽,不过,高浓度样本在分光光度计上测定就不用浓缩。

 

若何建立特性化的阐发利用?


荧光计形式

挑选荧光计形式,Qubit 4 荧光计便能够或许被用做小型的荧光计。在荧光计形式里,差别于利用阐发试剂盒时的校准和基于算法的计较成果,仪器间接发生并显现每一个样本的原始荧光数据(RFU)。荧光计形式许可您能够或许手动挑选发射光源:蓝色LED ( 最大~470nm) 或白色LED ( 最大~635 nm)。若是挑选蓝光发射,仪器读取绿色或远红外通道的荧光;若是挑选红光发射,则仅读取远红外通道的荧光。

经由进程荧光计形式搜集的数据能够或许用于设想您的特性化assay 共同MyQubit 建立新的阐发范例。

 

MyQubit- 为Qubit 4 荧光计设想和建立新的阐发范例

Qubit 4 荧光计与MyQubit assay 设想东西兼容。您只要在此在线东西上输出您的assay 参数,保管并上传.qbt 文件至您的Qubit 4 荧光计,便可运转您的特性化阐发,拓展Qubit 的利用规模。

* 今朝,咱们已开辟6 个新的阐发( 胆固醇、葡萄糖、半乳糖、谷氨酸、过氧化氢、蔗糖阐发),若有须要可间接下载上传至您的Qubit。

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Qubit RNA IQ Assay

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疾速、切确地检测RNA 完全性和品德

RNA 样品的品德评价对下流的尝试的胜利尤其主要。全新上市的InvitrogenTM Qubit RNA IQ(Integrity & Quality )试剂盒和Qubit 4 荧光计配套利用,只要两步便能够或许切确辨别完全和降解RNA,疾速评价RNA 品德或降解水平。无需出格的处置步骤,复杂的样本制备或冗长的期待进程——起码仅需1 uL,浓度为0.5-1.5 ug/uL 的待测样品,便可在4 秒内取得RNA IQ 成果。

Qubit RNA IQ 试剂盒接纳两种怪异的荧光染料——一种与大RNA,完全和/ 或布局RNA 连系,另外一种挑选性地连系较小、降解的RNA(图5),两种染料连系利用,可疾速地评价RNA样品的完全性和品德。利用时,您只要将样本插手RNA IQ 任务液,而后在Qubit 4 荧光计上实现检测。检测成果会供给RNA 样品完全性和品德的总数值或RNA IQ#,和样本中巨细RNA 的百分比值(图6)。与其余RNA 品德分数近似,RNAIQ# 评分规模为1 到10,数值越大,申明RNA 的品德越高,完全性越好。

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图5. RNA IQ 试剂挑选性连系大RNA 和小RNA。三个含不异100 ng/mL rRNA (E. coli) 和差别含量siRNA (0 to50 ng/uL) 的样本都利用 Qubit RNA IQ assay (Q33221, Q33222) 在 Qubit 4 荧光计上检测。A 图和B 图别离展现了绝对荧光单元值RFUs) (A) 和IQ# 值 (B) 。

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图 6. Qubit 4 荧光计和QubitRNA IQ 成果

 

与电泳法比拟,RNA IQ 检测法有何上风?

Qubit RNA IQ 为检测RNA 样本是不是降解供给一种疾速简略的体例。与基于微流体芯片法比拟,RNA IQ 法须要的装备自制,操纵简略,更主要的是检测所需的时候大大延长。凡是来讲,实现12 个样品的检测,RNA IQ 法约须要10 分钟,而利用微流体法,约须要75 分钟。若是您只是须要简略评价RNA 样品是不是降解,能够或许利用RNA IQ 法疾速实现检测,但若是您须要取得详细的RNA 片断巨细及散布信息,咱们仍然保举您利用基于凝胶或微流体的电泳体例。

RNA IQ 检测成果反应样本中大RNA 和/ 或布局RNA 和小RNA的百分比,其数值与电泳法成果正相干(图7)。但是,须要注重的是IQ# 值反应的是样本中巨细RNA 的比值,因为计较道理差别,IQ# 值与其余品德评价体例获得的成果之间存在一些差别(图8)。对特定样本或下流利用,咱们保举您最起头同时利用RNA IQ 试剂盒和传统电泳法来肯定丈量值的相干性。

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图 7. rRNA 经RNase 酶处置,随后用Qubit RNA IQ Assay或 Agilent Bioanalyzer™ 仪器评价完全性和品德。将750 fMRnase A 插手不异量的 100 ng/mL rRNA (E. coli) 溶液中,在差别的时候点用RNase OUT 处置,而后用Qubit RNA IQ Assay 在Qubit 4 荧光计 (A) 仪器或 AgilentBioanalyzer™ Prokaryote TotalRNA Nano chip (B) 检测。 

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图 8. 总RNA 经RNAase 处置1 min 后, 利用 QubitRNA IQ assay 和 Agilent Bioanalyzer™ 仪器检测RNA 完全性和品德。 rRNA 经0.5pg/μL RNase A 处置,1 min 后插手 RNaseOUT 。样品经由进程 ProkaryoteTotal RNA Nano Chip 或Qubit RNA IQ Assay (货号:Q33221, Q33222) 在 Qubit 4 荧光计上检测。品德分数的差别,IQ#: 9.8 和 RIN#: 8.9 是 5s rRNA 和 tRNA 展现三级布局和连系大RNA 染料的旌旗灯号成果。

 

仪器参数:

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订购信息:

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注:

1. Qubit RNA IQ assay 和Qubit 4 System Validation Assay 只能够或许在Qubit 4 上利用,不可用于Qubit、 Qubit 2.0 或Qubit 3 荧光计。

2. Qubit RNA XR kits 比拟 Qubit RNA BR kits,具备更宽的静态规模。

3. Qubit 1X dsDNA HS Assay Kit 为即用型试剂盒,无需设置装备摆设任务液,间接加样便可上机检测,与Qubit dsDNA HS Assay 具备不异的活络度。

4. 新品1X dsDNA HS 或 RNA XR assays 亦合用于Qubit 2.0 和Qubit 3 荧光计,但须要从网站下载MyQubit.qbt 文件更新仪器按钮和算法。

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视频材料:


1、装备先容

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2、RNA、DNA、卵白测定

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3、数据办理

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4、更多功效

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